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【干貨分享】第二期：顏色補(bǔ)償那些事兒

多重?zé)晒釶CR已經(jīng)廣泛地使用在各種病原體的檢測中，這得益于熒光PCR檢測儀多通道熒光采集的功能。

2022-01-20

多重?zé)晒釶CR已經(jīng)廣泛地使用在各種病原體的檢測中，這得益于熒光PCR檢測儀多通道熒光采集的功能。在使用羅氏480（LC1/LC2/Z cobas)進(jìn)行多重檢測時，往往會遇到需要做顏色補(bǔ)償?shù)那闆r，那么今天小編就與您聊一聊關(guān)于顏色補(bǔ)償?shù)哪切┦聝簙

為什么羅氏480需要做顏色補(bǔ)償？

首先，我們來看一下羅氏480的激發(fā)波長及檢測波長

LightCycler1的濾光片:

圖片.png

LightCycler2的濾光片:

圖片.png

熒光通道發(fā)射光譜拋物線示意圖：

圖片.png

從上圖可以看出在一個多色反應(yīng)中，由于各染料的發(fā)射光的波長有重疊，導(dǎo)致一個通道能夠捕獲到另一個通道所檢測的染料信號。這種熒光信號的溢出會導(dǎo)致無效的數(shù)據(jù)產(chǎn)生，即我們常說的“串色”或“串孔”現(xiàn)象。

由于每臺儀器的濾光片是固定的，無法改變其激發(fā)光與檢測光波長；想要校正這種溢出，在運(yùn)行這個實驗或分析這個數(shù)據(jù)時，就需要應(yīng)用顏色補(bǔ)償目標(biāo)。當(dāng)用顏色補(bǔ)償目標(biāo)時，LightCycler 算法會使用補(bǔ)償實驗文件中的數(shù)據(jù)來補(bǔ)償熒光值的溢出，補(bǔ)償后即可以看到每個通道特定的信號。

什么時候要做顏色補(bǔ)償？

只有當(dāng)多個熒光通道（比如VIC和ROX同時使用）用于數(shù)據(jù)分析時才有必要采用顏色補(bǔ)償，當(dāng)使用單通道時無需采用顏色補(bǔ)償。

另外，由于合成的探針的熒光染料各個廠家之間存在一定的差異性，因此，不同廠家之間的顏色補(bǔ)償數(shù)據(jù)一般不通用。在更換檢測試劑盒時，需要進(jìn)行對應(yīng)廠家試劑的顏色補(bǔ)償實驗哦~

如何使用顏色補(bǔ)償？

首先，按顏色補(bǔ)償說明書進(jìn)行顏色補(bǔ)償實驗

其次，進(jìn)行常規(guī)的檢測實驗

最后，在每次檢測完畢的分析界面調(diào)用補(bǔ)償數(shù)據(jù)，具體操作如下：

A. 點擊Color Comp 旁下拉菜單

圖片.png