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理想的病原體核酸檢測(cè)方式應(yīng)該是準(zhǔn)確、靈敏、快速、廉價(jià)、便攜，并且能在各種環(huán)境下對(duì)任何病原體進(jìn)行檢測(cè)。近年來(lái)，基于成簇間隔的短回文重復(fù)序列及其關(guān)聯(lián)蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated proteins, CRISPR/Cas)的新型分子診斷工具，似乎具有成為這樣理想化核酸檢測(cè)平臺(tái)的潛力

下一代分子診斷技術(shù)！

從1987年首次發(fā)現(xiàn)CRISPR, 到最近幾年CRISPR-associated(Cas)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，以及2020年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)?lì)C給了CRISPR的發(fā)現(xiàn)者，CRISPR技術(shù)被譽(yù)為會(huì)改變和造福人類的發(fā)明。短短幾年時(shí)間，CRISPR技術(shù)成為科研界的熱門內(nèi)容，被稱為下一代分子診斷技術(shù)！

2020諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)得主:

Emmanuelle Charpentier教授、Jennifer Doudna教授

趙國(guó)屏院士以新冠為例，講到對(duì)于一個(gè)“好的”臨床檢驗(yàn)產(chǎn)品，有5個(gè)關(guān)鍵要求：

第一，就是要正確，不能“錯(cuò)怪好人”，不能出現(xiàn)“假陽(yáng)性；必須準(zhǔn)確，不能“張冠李戴”，專一性、特異性要好。第二一定要靈敏，也就是說(shuō)不能“放過(guò)壞人”，不能出現(xiàn)假陰性。第三最好能夠“定量”。定量是確定檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確與否的重要佐證。第四，要快速，簡(jiǎn)便；第五成本要盡可能低。

胡必杰教授表示，趙院士提到的“不抓錯(cuò)好人”、“不放過(guò)壞人”，同時(shí)定量，讓臨床醫(yī)生更加精準(zhǔn)地去辨別是感染的病原體還是污染的病原體，同時(shí)簡(jiǎn)捷方便與價(jià)優(yōu)，是非常重要的。如果一項(xiàng)分子診斷技術(shù)非常昂貴，很多病人享受不到，只有達(dá)到以上五點(diǎn)要求，這項(xiàng)技術(shù)才能廣泛應(yīng)用到臨床，最終讓老百姓和普通病人得益。

等溫?cái)U(kuò)增與CRISPR診斷技術(shù)的有機(jī)結(jié)合

而后趙院士提到，在過(guò)去幾十年的時(shí)間里，等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)得到了極大的發(fā)展，現(xiàn)有也已經(jīng)開發(fā)了很多種方法體系，包括經(jīng)典LAMP技術(shù)和RPA技術(shù)。等溫?cái)U(kuò)增有快速靈敏，對(duì)儀器要求低，是分子POCT診斷領(lǐng)域重要的技術(shù)力量。

第二項(xiàng)技術(shù)即是最近發(fā)展的CRISPR診斷技術(shù)。主流CRISPR診斷技術(shù)主要基于CRISPR-Cas12或Cas13來(lái)開發(fā)，利用了Cas蛋白“反式切割活性”，可以將體系中的單鏈核酸高效的切割。

所以，CRISPR診斷的原理就是：當(dāng)待檢體系中存在靶標(biāo)核酸時(shí)，Cas蛋白在向?qū)NA的引導(dǎo)下特異識(shí)別靶標(biāo)序列，形成復(fù)合物，進(jìn)而被激發(fā)出針對(duì)切割單鏈核酸的“反式切割活性“，將體系中的熒光標(biāo)記探針切碎，發(fā)出熒光信號(hào)，完成檢測(cè)過(guò)程，通過(guò)檢測(cè)體系是否發(fā)光來(lái)判斷靶標(biāo)核酸是否存在。

將恒溫?cái)U(kuò)增和CRISPR診斷技術(shù)結(jié)合起來(lái)，既可以利用恒溫?cái)U(kuò)增的快，靈敏和簡(jiǎn)便，又可以利用CRISPR的特異和靈敏，在進(jìn)行快檢的同時(shí)，既不用擔(dān)心檢測(cè)的假陽(yáng)性和假陰性問(wèn)題，也不用擔(dān)心PCR檢測(cè)中不確定的“灰區(qū)”問(wèn)題。

對(duì)于伯杰利用由其實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的，吐露港公司授權(quán)的CRISPR診斷專利技術(shù)，成功開發(fā)的國(guó)內(nèi)首款CRISPR快檢一體機(jī)BG-Nova-X8，院士對(duì)其速度和通量表示了贊賞，認(rèn)為儀器可以在30-40分鐘內(nèi)完成24個(gè)新冠標(biāo)本檢測(cè)，可以期待這個(gè)系統(tǒng)能夠?yàn)樾鹿诳鞕z多做貢獻(xiàn)。

趙院士提到，未來(lái)技術(shù)的展望，等溫?cái)U(kuò)增的特異性和靈敏度都需要進(jìn)一步提升，可以通過(guò)和別的技術(shù)結(jié)合，“取長(zhǎng)補(bǔ)短”來(lái)提升檢測(cè)特異性和靈敏度，這一次伯杰將等溫?cái)U(kuò)增與CRISPR技術(shù)的嘗試，就是邁出了可喜的一步。

等溫?cái)U(kuò)增的一管多重問(wèn)題還需要?jiǎng)?chuàng)新的思路或者原理方面的突破，另一方面把恒溫?cái)U(kuò)增，CRISPR診斷技術(shù)，和數(shù)字PCR技術(shù)的絕對(duì)定量原理結(jié)合起來(lái)，來(lái)實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量，在未來(lái)有更多發(fā)展的可能性。 

CRISPR技術(shù)的未來(lái)研究方向

可以說(shuō)，CRISPR/Cas系統(tǒng)毫無(wú)疑問(wèn)為感染性疾病的診斷提供了新的方法和契機(jī)，總結(jié)來(lái)說(shuō)，它具有如下優(yōu)點(diǎn)：

· 相較于基于PCR的傳統(tǒng)方法，毫不遜色的靈敏度和特異度

· 檢測(cè)所需時(shí)間短

· 簡(jiǎn)單便攜，不依賴昂貴的儀器和嚴(yán)苛的實(shí)驗(yàn)環(huán)境

· 試劑耐受冷凍干燥，便于儲(chǔ)存和攜帶

· 標(biāo)本前處理可以非常簡(jiǎn)單

· 結(jié)果讀取方便，能通過(guò)熒光或者肉眼讀取結(jié)果、

這幾大優(yōu)點(diǎn)使得CRISPR檢測(cè)平臺(tái)可以對(duì)病原體核酸分子實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)快速檢測(cè)。根據(jù)以上的分析，未來(lái)CRISPR技術(shù)的兩大研究方向也初見(jiàn)雛形：